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| 冰蛋品的细菌检验方法 |
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| 时间：2004-02-04 09:18:23.36 肉业行业网 |
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中华人民共和国商业部部标准 中华人民共和国商业部部标准
SB 115-82
冰蛋品的细菌检验方法 代替SB
3306-66
───────────────────────────────────────
本标准适用于冰蛋品的肠道致病菌大肠菌群及细菌数的检验。
1
取样方法
1.1
批的划分
以接触蛋液的工具、设备彻底消毒一次时的生产数量为一批。巴氏消毒的冰蛋可按
生产量的大小每隔1～4小时奖巴氏消毒器冲洗消毒一次,每两次冲洗之间,按顺序划为
2～4批,如发现致病菌时,本批即不合格,前面的批可不受牵连,后面的批予以复验,按复
验结果处理。
1.2
采样数量
按生产批号,在装听时流动取样。
1.2.1
检验肠道致病菌时,分蛋(冰鸡蛋黄、冰鸡蛋白)及冰鸡全蛋,取样按每250公斤
取样一次,量约100克,每500公斤取样二次,合为一个检样；巴氏消毒冰鸡全蛋取样按500
公斤取样一次,每1000公斤取样二次,合为一个检样。
1.2.2
检验细菌数、大肠菌群时,在每批装听过程前、中、后流动取样,每批合为一
个检样。
1.3 用具
a. 电钻与钻头；
b.
玻璃漏斗或铝制漏斗；
c. 密封式250克敞口玻璃瓶。
注：上项用具在使用前应在160～180℃
的温度下干燥消毒2小时。抽样钻头每抽取样
品一批后应以75％酒精进行浸泡消毒。
1.4 方法
1.4.1
在生产过程中灌取流动样品的敞口扦样瓶(罐),随该批产品入冷冻室,冷冻完
毕后作细菌检验使用。
1.4.2
成品钻样时,先将铁听开口处的外部用75％的乙醇进行消毒,而后将盖启开,用
电钻由顶至底斜角钻入,徐徐钻出样品,然后抽出电钻,就中取约200克于扦样瓶(罐)中,
封实后准备检验。
2
检验方法
2.1 肠道致病菌的检验
2.1.1
试样制备：将盛冰蛋的样品瓶浸泡冷水中(谨慎小心,勿使水浸入瓶内)使样品
融化后取出,充分摇和均匀。
2.1.2
增菌培养：以无菌操作,由每瓶样品中采取一个试样,接种于亚硒酸盐煌绿增
菌培养基中(此培养基预先置于盛有约30粒3～4毫米直径玻璃珠的灭菌玻璃瓶内)盖紧瓶
盖,振荡均匀,使检样与培养基充分溶和,然后放入37℃定温箱中培养18～24小时。
培养基数量及样品数量按表1规定：
表
1
─────────┬──────────────┬────────────
培 养 基 名 称 │ 接种试样数量 │
培养基数量
─────────┼──────────────┼────────────
亚硒酸盐煌绿 │ 30克 │
150毫升
─────────┴──────────────┴────────────
2.1.3
分离培养:经过增菌后,接种于远藤氏或伊红美蓝培养基一个,及去氧胆酸盐枸
橼酸盐或S·S琼脂培养基一个,置37℃培养箱中,对鉴别培养基培养24小时,对选择性培
养基培养48小时,然后观察结果。如无可疑菌落即可做阴性结果的报告,如有可疑菌落则
在每个平皿上挑取2～3个菌落接种于三醣铁琼脂斜面培养基上,再于37℃培养箱中培养
18～24小时,然后按表2作初步鉴定。
三醣铁琼脂斜面培养基反应与鉴别见表2:
表
2
───────────────────┬─────────────────
反 应 │ 鉴
别
──────┬─────┬──────┼─────────────────
底 层 │ 斜 面 │ 硫 化 氢
│
──────┼─────┼──────┤
○＋ │ ＋ │ ＋ │
──────┼─────┼──────┤
○＋ │ ＋ │ －
│
──────┼─────┼──────┤ 非沙门氏菌属及志贺氏菌属
＋ │ ＋ │ － │
(可作为报告的依据)
──────┼─────┼──────┤
－ │ － │ ＋ │
──────┼─────┼──────┤
－ │
－ │ － │
──────┼─────┼──────┼─────────────────
＋ │ － │ ＋
│
──────┼─────┼──────┤
○＋ │ － │ ＋ │
可疑为沙门氏菌属
──────┼─────┼──────┤
○＋ │ － │ －
│
──────┼─────┼──────┼─────────────────
＋° │ － │ －
│
──────┼─────┼──────┤ 可凝为沙门氏菌属及志贺氏菌属
＋ │ － │ －
│
──────┴─────┴──────┴─────────────────
注:○＋表示产酸产气反应。
＋°表示微量产酸产气反应。
＋表示产酸或产硫化氢。
－表示不产酸不产气,不产硫化氢。
2.1.4
生化及血清学鉴定。
2.1.4.1
生化试验:
三醣铁琼脂斜面培养基属可疑沙门氏菌属的反应者,则可再行接种一套生化试验(
也可以先进行血清凝集试验)：属可疑志贺氏菌属的反应者,先进行血清凝集试验,必要
时再进行生化试验,其反应如表3。
沙门氏菌属生化反应与鉴别见表3:
表
3
──────────────────┬──────────────────
项 目 │ 反
应
──────────────────┼──────────────────
硝 酸 盐 │ 还
原
──────────────────┼──────────────────
尿 素 │ 不 分
解
──────────────────┼──────────────────
靛 基 质 │ 不 产
生
──────────────────┼──────────────────
乳 糖 │ 不 发
酵
──────────────────┼──────────────────
甘 露 醇 │ 发
酵
──────────────────┼──────────────────
蔗 糖 │ 不 发
酵
──────────────────┼──────────────────
水 杨 素 │ 不 发
酵
──────────────────┴──────────────────
注:① 醣类发酵阴性反应者,应观察14日始得报告阴性。
②
上列各项生化试验应同时进行接种。
志贺氏菌属反应与生化鉴别见表 4:
表
4
──────────┬─────┬────┬─────┬────┬─────
项 │ │ │ │ │
菌 目 │ 甘露醇 │
鼠李糖 │ 木胶糖 │ 乳 糖 │ 靛基质
别 │ │ │ │
│
──────────┼─────┼────┼─────┼────┼─────
志贺氏痢疾杆菌 │ － │ － │ － │ － │
－
──────────┼─────┼────┼─────┼────┼─────
史氏痢疾杆菌 │ － │ ＋ │ － │ － │
＋
──────────┼─────┼────┼─────┼────┼─────
宋氏痢疾杆菌 │ ＋ │ ＋ │ － │ ＋迟 │
－
──────────┼─────┼────┼─────┼────┼─────
福氏痢疾杆菌 │ ＋ │ － │ － │ － │ －
│ －
│ │ │ │ ＋
──────────┴─────┴────┴─────┴────┴─────
注：①
“＋”为阳性反应,“－”为阴性反应。
② 醣发酵阴性反应者,应观察14日始得报告阴性。
2.1.4.2 血清凝集试验:
a.
经表3生化试验而符合于沙门氏菌属的特性者,最后则进行血清学鉴定,即以沙门
氏菌属多价诊断血清进行玻片凝集试验。
b.
玻片凝集试验,挑取在三醣铁琼脂斜面培养基中,疑似沙门氏菌落于洁净玻片的血
清滴上,充分混合,使成乳液后,视其有无凝集现象,未见凝集发生者,可作阴性结果报
告。如凝集细小不易辩别时,可用放大镜或低倍显微镜进行观察,为避免细菌有自凝现象
起见,可在玻片另侧另加生理盐水作对照试验。
c.
如沙门氏菌多价血清有凝集现象者,则报告发现或检出沙门氏菌属,如必要分型者,
则再行单价因子血清凝集及鞭毛因子血清凝集以确定其型别。
d.
在三醣铁琼脂斜面培养基中,疑似志贺氏菌属反应者,以志贺氏多价血清作凝集,
凝集阳性时报告发现志贺氏菌属,必要时可以进行单价诊断血清鉴定,及生化试验以确定
其属宋氏、福氏或史氏痢疾杆菌。
e.
结果的判断与报告方法：
(a)
沙门氏菌属：
生化试验及血清学鉴定结果均符合沙门氏菌属之特点时,即报告为“发现沙门氏菌
属”。
生化试验结果符合沙门氏菌属的生化特性而血清学鉴定为阴性时,再进行“KCN试
验”,如仍符合时,则报告“发现沙门氏菌属——未鉴定”,如不符合则报告为“未发现
沙门氏菌属”。
凡生化试验及血清学鉴定结果均不符合者,则报告为“未发现沙门氏菌属”。
生化试验不符合者,应根据下列不同情况报告：
尿素或硝酸盐还原试验不符合者即可报告为“未发现沙门氏菌属”
乳糖、蔗糖、水杨素、甘露醇及靛基质反应有两种或两种以上不符合者,即报告为
“未发现沙门氏菌属”。
靛基质试验阳性者或乳糖、蔗糖、水杨素任一种在两天或两天以上发酵或甘露醇反
应不符合者,则以单因子血清及其他生化试验作最后鉴定。
(b)
志贺氏菌属:
经血清学鉴定和生化试验为阳性者即报告为“发现志贺氏菌属”。
血清学鉴定为阴性者,即报告为“未发现志贺氏菌属”。
2.2
细菌数检验法(平板培养数菌法)：
2.2.1 稀释及培养：
a.
以无菌手续充分摇动拌匀,以无菌吸管或玻管吸取均匀蛋液10～15克于250毫升无
菌的玻璃瓶中(瓶内预先置入直径3～4毫米玻璃珠30粒左右),于每瓶中加入相当试样重
量9倍的灭菌生理盐水作成十倍稀释液,盖紧瓶盖以振荡均匀,使成乳剂。
b.
用1毫升灭菌吸管(1/10毫升刻度到尖端)吸取上项稀释液１毫升,注入预先备好的
一列灭菌试管(每管内均盛有灭菌生理食盐水9毫升)的第一管中,作成百倍稀释液(此液
需用该吸管吐数次使之混和均匀),然后再以该吸管吸取百倍稀释液1毫升注入预先备好
的灭菌二重皿中,同样共接种二重皿三个。
c.
以另一灭菌吸管,由百倍稀释液中吸取1毫升加入预先备好的一列灭菌试管的第二
管中,依上述方法作成千倍稀释液,并接种二重皿三个。
d.
依同法作成万倍十万倍五十万倍等稀释液(可根据具体情况作成适宜的稀释液3个,
每个3列),并皆按上法进行接种,然后于每只二重皿内倾入已溶化的约45℃普通琼脂培养
基pH7.0(此培养基溶化后预置入45℃恒温水浴锅内)15～20毫升,轻轻转动二重皿,使培养
基与稀释液混合均匀后静置不动。
e.
将上项作成的二重培养皿,等其凝固后,以皿底在上皿盖在下的倒置方式放入37℃
培养箱中。
2.2.2 数菌法：
a.
以上项平板培养于48小时取出,选择其菌落在 30～300之间者为准,即以该稀释倍
的三个平板培养分别计算其菌落数。
b.
将上项所得的三个平皿的菌落数,平均再乘以该稀释倍数,即得出该样品每克所含
细菌数。
2.2.3 报告法：
a.
按平板培养数菌法,检出1克中所含菌数以百或千为尾数作报告。
b. 应注明在37℃经48小时平板培养数菌法检查的结果。
2.3
大肠菌群检验法
2.3.1 稀释及培养：
a.
在进行前项菌数培养的同时,依次选择三种不同稀释液各取1毫升分别接种于乳糖
胆盐发酵管中,对每种稀释液均作三列培养。
b.
将上项已接种的发酵管,轻轻摇动使混合均匀,然后一并置35～37℃培养箱中培养
24±2小时。
2.3.2 结果的判断及报告方法：
a.
如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为“大肠菌群阴性”。
b.
如产气者,将产气的发酵管分别接种在伊红美蓝平板(也可采用远藤氏琼脂平板或
麦康凯琼脂平板)上,置35～37℃培养箱内,培养18～24小时,然后取出。
在上述平板上挑取大肠菌群可疑菌落1～2个进行革兰氏染色镜检,同时接种乳糖复发
酵管,置35～37℃培养箱内,培养24±2小时,观察气产情况。
c.
凡乳糖复发酵管产气,革兰氏染色为阴性,无芽胞杆菌,即可报告为“大肠菌群阳
性”；如乳糖不产气或革兰氏染色阳性,则报告“大肠菌群阴性”。
2.3.3
查表:根据证实为大肠菌群阳性的管数,按表5报告大肠菌群最近似数。
每100毫升(克)检样中大肠菌群最近似数(M.P.N.)检索表
表
5
───────────────────────────────┬──────
检 样 量
│大肠菌群最
───────┬──────┬───────┬────────┤近似数个/100
10毫升(克)×3│1毫升(克)×3│0.1毫升(克)×3│0.01毫升(克)×3
│毫升(克)
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
0 │ 0 │ │ │ 0
0 │ 1 │ │ │
3
0 │ 2 │ │ │ 6
0 │ 3 │ │ │
10
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
1 │ 0 │ │ │ 4
1 │ 1 │ │ │
7
1 │ 2 │ │ │ 12
1 │ 3 │ │ │
16
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
2 │ 0 │ │ │ 9
2 │ 1 │ │ │
15
2 │ 2 │ │ │ 20
2 │ 3 │ │ │
30
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
3 │ 0 │ │ │ 25
3 │ 1 │ │ │
45
3 │ 2 │ │ │ 110
3 │ 3 │ │ │
250
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
│ 0 │ 0 │ │ 0
│ 0 │ 1 │ │
30
│ 0 │ 2 │ │ 60
│ 0 │ 3 │ │
100
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
│ 1 │ 0 │ │ 40
│ 1 │ 1 │ │
70
│ 1 │ 2 │ │ 120
│ 1 │ 3 │ │
160
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
│ 2 │ 0 │ │ 90
│ 2 │ 1 │ │
150
│ 2 │ 2 │ │ 200
│ 2 │ 3 │ │
300
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
│ 3 │ 0 │ │ 250
│ 3 │ 1 │ │
450
│ 3 │ 2 │ │ 1100
│ 3 │ 3 │ │
2500
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
│ │ 0 │ 0 │ 0
│ │ 0 │ 1 │
300
│ │ 0 │ 2 │ 600
│ │ 0 │ 3 │
1000
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
│ │ 1 │ 0 │ 400
│ │ 1 │ 1 │
700
│ │ 1 │ 2 │ 1200
│ │ 1 │ 3 │
1600
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
│ │ 2 │ 0 │ 900
│ │ 2 │ 1 │
1500
│ │ 2 │ 2 │ 2000
│ │ 2 │ 3 │
3000
───────┼──────┼───────┼────────┼──────
│ │ 3 │ 0 │ 2500
│ │ 3 │ 1
│ 4500
│ │ 3 │ 2 │ 11000
│ │ 3 │ 3 │
25000
───────┴──────┴───────┴────────┴──────
注:表若不够用时,可依此类推。
3
培养基制备和血清生化试验
3.1 培养基制备法
3.1.1 亚硒酸盐煌绿增菌培养基:
3.1.1.1 材料:
蛋白胨
5克
酵母膏 5克
甘露醇 5克
牛磺胆酸钠(Sod,Taurocholeta) 1克
亚硒酸氢钠(NaHSeO3) 4克
煌绿
0.005克
磷酸盐缓冲液(0.25克分子)(pH7.0) 100毫升
蒸馏水
900毫升
最终酸碱度:用于冰蛋制品试样时为pH7.0±0.1。
3.1.1.2 方法:
a.
将前列四种药剂放入蒸馏水中加温溶解。
b. 以高压蒸气121℃(15磅／英寸)15分钟灭菌,如需立即使用,可盛于带盖容器内煮
沸灭菌。
c.
待溶液冷至约70℃时加入灭菌亚硒酸氢钠。
d. 加入灭菌0.25克分子磷酸盐缓冲液。
e.
检查上述混合液的酸碱度应为pH7.0±0.1,如不符合要求,则用氢氧化钠溶液调节
酸碱度至所需要的酸碱度。
f.
加煌绿或0.1％煌绿水溶液。
g.
分装于灭菌250毫升带盖广口瓶或其他灭菌容器内,每瓶定量分装150毫升,并于1
～5日内用毕。
以上3～7项操作均以无菌操作方法进行。
3.1.1.3
试剂:
a.
亚硒酸氢钠:可称取亚硒酸氢钠按20％浓度溶于蒸馏水中,并定量分装于试管或三
角瓶中,单独以121℃高压蒸气灭菌15分钟储存备用。亦可采用其他有效灭菌方法灭菌,但
每管或每瓶须一次用尽,以免污染。亚硒酸氢钠每因厂牌不一,其酸碱度不一,使用前应加
注意。
b.
磷酸盐缓冲溶液的配制:每因药品的纯度及含水量和蒸馏水的pH值影响其pH值,临
制备前应加检查。如以无水纯磷酸盐配制,则：
磷酸氢二钾K2HPO40.25克分子溶液:称取磷酸氢二钾43.5458克溶于蒸馏水作成1000
毫升,即得0.25克分子浓度的磷酸二氢钾水溶液。
磷酸二氢钾KH2PO40.25克分子溶液:称取磷酸二氢钾34.0223克溶于蒸馏水中作成1000
毫升,即得0.25克分子浓度的磷酸二氢钾水溶液。
将以上两溶液的容量混合恰为pH7.0的缓冲液(如因药品纯度及蒸馏水酸碱度的影响,
使酸碱度不符合时,可稍加调整),并用121℃高压蒸气15分钟或其他有效灭菌法灭菌,以
此液100毫升加入900毫升培养基中,即使培养基每1000毫升中含有磷酸盐0.025克分子。
注：使用的磷酸盐含量应以100％计算,如纯度不够或带有结晶水时,必须用前换算。
煌绿水溶液：称取煌绿0.1克溶于100毫升蒸馏水中,即得0.1％煌绿水溶液,每1000毫
升培养基中加煌绿水溶液5毫升。即使培养基每1000毫升中含有0.005克。煌绿水溶液必
须新鲜,不宜久存。
3.1.1.4
几点注意事项和说明:
a.
本培养基的配制是否正确,关系到试样、药品等很多因素,为此在初次使用时,最好
是先将药品及蒸馏水检查,小量试作,取得经验后再大量使用。有时药品等虽为同厂出品,
但批号不同,其pH值也会有所变更,希加注意。
b.
配制本培养基的容器,避免使用铝锅,因碱性溶液与铝作用,易使培养基带有暗色。
c. 培养之基础液采用煮沸灭菌时,以五分钟为宜。
d.
亚硒酸氢钠在有还原物质的水中加热时,易被还原变为红色,因此配制溶液必须使
用蒸馏水。
e.
煌绿水溶液,宜新鲜配制,储存于带盖褐色瓶中,最好当日使用,当日配制,否则
影响效能。
3.1.2 远藤氏(ENDO)培养基：
3.1.2.1
材料:
无糖肉汤琼脂培养基 100毫升
乳糖 1克
10％碱性复红乙醇溶液 0.5毫升
10％亚硫酸钠溶液
0.25毫升
3.1.2.2 配制方法:
a.
取无糖肉汤琼脂培养基100毫升(其中含0.5％牛肉膏,1％蛋白胨,3％琼脂)加入乳
糖1克以117℃灭菌15分钟。
b.
用灭菌吸管加无菌碱性复红乙醇溶液0.5毫升。
c.
再加入新鲜配制加热煮沸的无菌10％亚硫酸钠溶液0.25毫升左右,摇动使之混和,
加入量视其变成淡红色为度。
d.
分注平板凝固后,保存冷暗处备用。
3.1.3 伊红美蓝培养基:
3.1.3.1 材料:
蛋白胨 10克
磷酸氢二钾(K2HPO4)
2克
琼脂 15克
乳糖 5克
蔗糖 5克
2％伊红(Y)溶液 10毫升
0.5％美蓝溶液 10毫升
蒸馏水
1000毫升
3.1.3.2 配制方法:
a. 将蛋白胨、磷酸氢二钾及琼脂溶入蒸馏水中缓缓加热,调整pH至7.2
b.
加入乳糖及蔗糖以121℃灭菌15分钟。
c. 用灭菌吸管加入无菌2％伊红溶液10毫升及0.5％美蓝溶液10毫升,摇匀,分注平板。
3.1.4
去氧胆酸盐枸橼酸盐(L.D.C)培养基:
3.1.4.1 材料:
牛肉浸液 1000毫升
蛋白胨 10克
琼脂
18～20克
去氧胆酸钠 5克
枸橼酸钠(Na3C6H5O7·2H2O) 20.6克
乳糖 10克
枸橼酸铁铵
2克
1％中性红溶液 2毫升
3.1.4.2 配制方法:
a. 溶解蛋白胨于牛肉浸液中调整pH至7.5过滤加入琼脂文火溶解。
b.
除中性红外,将其他各项依次加入使之溶解,并调整pH至7.4。
c.
加入1％中性红溶液混和后分装试管或锥形瓶内,塞上棉花塞,以流通蒸气消毒
15分钟(时间不宜过长,亦不需高压灭菌)。
d.
灭菌后制成平板保存备用。
3.1.5 S·S琼脂培养基:
3.1.5.1 材料:
蛋白胨 5克
乳糖 10克
胆盐
10克
枸橼酸钠 8.5克
硫代硫酸钠 8.5克
枸橼酸铁 0.5克
牛肉膏 5克
琼脂 15克
0.5％中性红溶液
4.5毫升
0.1％煌绿溶液 0.33毫升
蒸馏水 1000毫升
3.1.5.2
配制方法:除中性红及煌绿溶液后加外,其他量混合煮沸溶解,加15％氢氧化
钠溶液约1毫升,校正pH为7.0～7.2,再加入中性红与煌绿煮沸,冷至55℃左右,即可倒平板。
注：①
煌绿溶液配就后,应在十天内用掉,过久不宜使用。
② 如欲得最佳的培养结果,平板宜当日使用。
③ 本培养基切忌加高压杀菌,或过久的加热。
④
枸橼酸钠、硫代硫酸钠对大肠杆菌有抑制作用,煌绿在这种浓度下对大肠杆
菌无抑制作用,但有助于致病菌的生长。
⑤
沙门氏菌属与志贺氏菌属细菌因不发酵乳糖,故此等菌落不着色,而呈半透
明,如仍有大肠杆菌属细菌生长,则菌落呈红色或中心显红色,某些变形杆
菌和沙门氏菌的菌落中心也可显异色,这是硫化氢产生的征象。
3.1.6
三醣铁琼脂斜面培养基:
3.1.6.1 材料:
蛋白胨 20克
氯化钠 5克
乳糖 10克
蔗糖 10克
葡萄糖
1克
硫酸亚铁铵 0.2克
硫代硫酸钠 0.2克
酚红 0.025克
琼脂 13克
蒸馏水
1000毫升
3.1.6.2 配制方法:
a. 将各物溶于蒸馏水中,加热助其溶解,调整pH为7.3分装于小试管内,每管约4毫升。
b.
置蒸气灭菌器内以117℃灭菌15～20分钟,取出后置成高层的斜面备用。
3.1.7 普通琼脂平板培养基:
3.1.7.1 材料:
琼脂
20克
牛肉膏(以80％干物质计) 5克
葡萄糖 1克
食 盐 5克
蛋白胨 10克
蒸馏水 1000毫升
3.1.7.2
配制方法:
a. 将各物溶于蒸馏水中,加热助其溶解,校正pH为7.0。
b. 分装后以121℃灭菌15分钟。
3.1.8
乳糖胆盐发酵管:
3.1.8.1 材料:
蛋白胨 20克
猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5克
乳糖 10克
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液
0.6毫升
(或用0.04％溴甲酚紫水溶液25毫升)
蒸馏水 1000毫升
pH7.4
3.1.8.2
配制方法:将蛋白胨、乳糖及胆盐溶于水,校正pH,加入指示剂,分装试管,每管
10毫升或3毫升,并放入一个小导管,高压灭菌10磅15分钟。
3.1.9
试验用含糖发酵管:
3.1.9.1 材料:
蛋白胨水 100毫升
所需要之醣类 1克
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液
0.1毫升
3.1.9.2 配制方法:
a. 将所需要的醣类按上项数量加入蛋白胨水中混匀使之溶解。
b.
再加入溴甲酚紫乙醇溶液,则培养基呈鲜艳的紫色。
c. 分装于灭菌的童汉(Dunham)氏发酵管中,每管约3毫升。
d.
于112℃灭菌15分钟,取出后立即放置冷水中约10分钟取出。
e. 按试验室规定的代表各种醣类的标志标记。
f.
于37℃培养箱内鉴定无菌后保存备用。
注:① 蛋白胨水可用肉膏液、血消化液等代替。
②
常用的醣类主要有葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、水杨素,阿拉伯糖、木糖、
鼠李糖、卫矛醇、肌醇等。
3.1.10
童汉(Dunham)氏蛋白胨水培养基:
3.1.10.1 材料:
蛋白胨 10克
氯化钠 5克
蒸馏水
1000毫升
3.1.10.2
配制方法:
将各物加热溶解于蒸馏水内,调整pH为7.4,过滤后分装于试管内。以121℃灭菌20
分钟。
3.1.11
尿毒酶试验用培养基:
3.1.11.1 材料:
酵母浸出液 100毫升
磷酸二氢钾(KH2PO4)
9.1克
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 9.5克
尿素 2.0克
酚红 0.01克
蒸馏水 862.4毫升
3.1.11.2
配制方法:
a. 将上述各项除酚红外,依次加入蒸馏水中,使溶解。
b. 调整pH为6.8后加入酚红。
c.
用蔡司(seitz)滤菌器灭菌后,分装于已灭菌的小试管内,每管3毫升。
d.
如无滤菌器也可以108℃灭菌7～10分钟。
［附］酵母浸出液制法:
材料:
干酵母粉 25克
蒸馏水
1000毫升
配制方法:
将上项混合溶解搅拌均匀。
置流通蒸气消毒锅内蒸2**1/2小时。
取出静置澄清后,吸取上面清液保存备用。
3.1.12
硝酸盐培养基:
3.1.12.1 材料:
牛肉膏 3克
蛋白胨 5克
硝酸钾 1克
蒸馏水 1000毫升
3.1.12.2
配制方法:
将各物加热溶解于蒸馏水中,调整pH为7.0,以滤纸过滤后分装试管。以121℃灭菌
20分钟。
3.1.13
KCN试验用培养基:
3.1.13.1 材料:
(月示)蛋白胨(proteose Peptone) 10克
氯化钠
5克
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.225克
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 5.64克
蒸馏水 1000毫升
3.1.13.2
配制方法:
a. 将上项各物混合均匀,使完全溶解。
b.
调整反应为pH7.6,用滤纸滤过后分装锥形瓶中,每瓶100毫升。于121℃灭菌30
分钟。
c.
取出后以灭菌手续加入0.5KCN溶液,于每100毫升中加入2毫升。
d.
将已加入KCN溶液的培养基,再以无菌手续分装于灭菌的小试验管中,每管约2
毫升,并以灭菌的软木塞(或橡皮塞)蘸热石蜡封固。
e.
此项培养基制成后置＋4℃左右约可保存1～2周。
［附］
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