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| 肉与肉制品葡糖酸—δ内酯含量的测定 GB 9695-17.88 |
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| 时间：2004-01-31 16:40:57.767 肉业行业网 |
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中华人民共和国国家标准 UDC 637 中华人民共和国国家标准
UDC
637.51/.52
:443.06
肉与肉制品 葡糖酸—δ
—内酯含量的测定 GB
9695-17.88
Meat and meat products—Method for determination
of
glucono-delta-lactone
content
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本标准等同采用国际标准ISO 4133—1979
《肉和肉制品中葡糖酸-δ-内酯含量的测
定》。
1
主题内容与适用范围
本标准规定了肉和肉制品中葡糖酸-δ-内酯含量的测定方法。
本标准适用于肉和肉制品中葡糖酸-δ-内酯含量的测定。
2 引用标准
GB
9695.15 肉与肉制品 水分含量测定
GB
9695.19 肉与肉制品 取样方法
3 原理
用冷高氯酸提取试样中的葡糖酸-δ-内酯,离心,倾析并过滤上清液。在氢氧化钾作
用下葡糖酸-δ-内酯转化成葡糖酸酯。葡糖酸酯通过葡糖酸酯激酶和6-磷酸葡糖酸酯脱氢
酶的作用,产生5-磷酸核酮糖并使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)还原。
葡糖酸酯+ATP葡糖酸酯激酶 6-磷酸葡糖酸酯+ADP
6-磷酸葡糖酸酯+NADP 6-磷酸葡糖酸酯脱氢酶
5-磷酸核酮糖+NADPH+CO2+H-
用分光光度计测量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的光密度,然后计算出葡糖酸
-δ-内酯的含量。
4 试剂
所用试剂均为分析纯。容器应认真清洗,蒸煮或灭菌。水是重蒸水。
4.1 高氯酸(GB
623):0.4mol/L溶液。
4.2 氢氧化钾(GB 2306):2 mol/L溶液。
4.3 缓冲液：称取二苷氨酞2.64g和氯化镁(GB
672)
0.284g溶于150mL水中,用氢氧化钾
溶液调pH至8.0,定容到200mL。
4.4 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐:称取烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐50mg于带盖的小瓶
中,用5.0mL水溶解。
4.5
腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)溶液:称取腺嘌呤核苷三磷酸钠盐250mg和碳酸氢钠(GB
640)
250mg于带盖的小瓶中,加入5mL水溶解。
4.3,4.4,4.5试剂可在4℃下保存四星期。
4.6
每毫升6-磷酸萄糖酸酯脱氢酶(6-PGDH)悬液中含有6-PGDH2.0mg, 葡糖酸激酶和还原
型NADP氧化酶不超过0.05％。
4.7
每毫升葡糖酸激酶(GK)悬液中含有GK1.0mgNADP氧化酶含量不超过0.05％。
4.6,4.7试剂可在4℃下保存6个月。
5 仪器和设备
5.1
常用实验室仪器
5.2 绞肉机：孔径不超过4mm。
5.3 匀浆器。
5.4 离心机。
5.5
紫外分光光度计。
6 试样
6.1 按GB
9695.19取样。
6.2 至少取有代表性试样200g通过绞肉机绞两次混匀。
6.3 绞好的试样要尽快分析,若不立即分析,要密封冷藏贮存,防止变质和成分发生变
化,贮存的试样在启用时必须重新混匀。
7 分析步骤
7.1 葡糖酸酯的制备
称取试样50g(精确至0.01g),放入烧杯内,加入0.4mol/L冷高氯酸溶液100mL于匀浆
器中均浆,转移到离心管中,在3000r/min离心10min除去上面的脂层,上清液通过扇形滤
纸过滤到200mL锥形瓶中,弃去最初滤液10mL。取滤液50mL于100mL烧杯中,用氢氧化钾溶
液调pH至10。然后将烧杯内容物完全转移到100mL容量瓶中并定容,
置于冰浴中放置
20min后,用扇形滤纸过滤,弃去最初的滤液10mL。取滤液25mL或适当体积移入100mL容量
瓶中并定容。
7.2 测定
取缓冲液2.50mL,NADP溶液0.1mL和ATP溶液0.1mL分别置于两个比色杯中,
其中一个
比色杯加入提取液0.2mL为试验溶液,另一个比色杯中加入水0.2mL为空白溶液,然后再分
别加入6-磷酸葡糖酸酯脱氢酶0.05mL,混匀后放置5min,以空气为参比在365nm或340nm
波长处测光密度。
A1——试验溶液的光密度值
A1B——空白溶液的光密度值
取葡糖酸酯激酶悬液0.01mL分别置于上述两个比色杯中,立即混匀。10～15s内在
360nm或340nm波长处测光密度。以后每隔2min测一次,直到光密度值恒定为止。绘制出光
密度值与时间的关系曲线,并查出光密度最大值。
A2——试验溶液的光密度值
A2B——空白溶液的光密度值
8 分析结果的计算 M×m
计算公式： 100×━━━
2.96×196.1 100 100 100
100
X(％) = 0.908ΔA× ━━━━━━×━━━×━━━×━━━━━━━×━━
K×0.2×1000 1000 V 50
m
ΔA M×m
= 52.705×━━━━━×(100+━━━━)
K×V×m 100
式中:
X——葡糖酸-δ-内酯含量,％;
ΔA——(A2-A1) - (A2B-B1B);
196.1——D - (＋)
-葡糖酸的相对分子量；
K——在365nm波长时,K = 3.5cm**2/μmol；
在340nm波长时,K =
6.23cm**2/μmol；
V——取滤液的体积(25mL)；
M——试样的含水量；
m——试样质量g。
当符合允许差要求时,则取两次测定的算术平均值作为结果,精确到0.01％。
8 允许差
同一分析者同时或相继两次测定允许差不超过平均值的10％。
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附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部食品局提出。
本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。
本标准由中国肉类食品综合研究中心负责起草。
本标准主要起草人裴显庆、张纯。
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中华人民共和国商业部1988-02-25批准
1989-03-01实施
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